Oprócz knock-out istnieją ponadto biblioteki knock-down( CRISPRi) i aktywacyjne( CRISPRa), które wykorzystują umiejętność proteolitycznie dezaktywowanych białek fuzyjnych Cas9 (dCas9) do wiązania celu DNA, co oznacza, że gen zainteresowanie nie jest ucinane, ale nadmiernie wyrażane lub tłumione. Dzięki temu system CRISPR / Cas9 stał się jeszcze bardziej interesujący w edycji genów. Nieaktywne białko dCas9 moduluje ekspresję genu poprzez kierowanie represorów lub aktywatorów dCas9 w kierunku promotora lub miejsca startu transkrypcji obiektywnych genów. W przypadku genów represji Cas9 można połączyć z domeną efektorową KRAB, która tworzy complex z gRNA, podczas gdy CRISPRa wykorzystuje dCas9 w fuzji z odrębnymi domenami aktywacji transkrypcji, które ponadto są kierowane przez gRNA do regionów promotorowych w celu regulacji w górę formy ekspresji.
Aplikacje
Modele chorób
Modyfikacja genomu Cas9 umożliwiła szybkie i wydajne generowanie modeli transgenicznych w dziedzinie genetyki. Cas9 można łatwo wprowadzić do obiektywnych komórek wraz z sgRNA poprzez plazmid transfection w regulacji w celu modelowania rozprzestrzeniania się chorób i odpowiedzi komórki na infekcję i obrony przed nią. Umiejętność wprowadzenia Cas9 in vivo pozwala na tworzenie dokładniejszych modeli usług genowych i efektów mutacji, z drugiej strony unikając mutacji poza celem, zwykle obserwowanych przy starszych metodach inżynierii genetycznej.
Zdjęcie 171A | Przegląd rozszczepiania transfection i DNA przez CRISPR-Cas9 (podczas projektowania plazmidu crRNA i tracrRNA są często łączone w jedną nić RNA) | Nielsrca / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:CRISPR_transfection.png) from Wikimedia Commons
Autor : John Kaisermann
Komentarze
Prześlij komentarz